HyperSilMag-NTA (100mL)

필요 물품:

• HyperSilMag-NTA 비드 (Ni²⁺ 또는 Co²⁺ 충전됨)
• His-tag 단백질 샘플
• 결합 버퍼 (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0)
• 세척 버퍼 (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 20 mM imidazole, pH 8.0)
• 용출 버퍼 (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 8.0)

절차:

1. 평형화: 결합 버퍼로 NTA 비드를 2회 세척하십시오.
2. 결합: 샘플을 비드에 첨가하십시오. 인큐베이션 1 hour at 4°C with gentle rotation to allow His-tag binding to Ni-NTA.
3. 자성 분리: 자석으로 비드를 모으십시오. 통과액(flow-throµgh)을 제거하고 따로 보관하십시오.
4. 세척: Wash 3회 with 세척 버퍼 (20 mM imidazole) to remove non-specifically bound proteins.
5. 용출: 추가 용출 버퍼 (250 mM imidazole). 인큐베이션 5 분. 정제된 His-tag 단백질이 포함된 용출액을 수집하십시오.
6. Regeneration:

용량: 비드 1g당 > 40 mg His-tag 단백질

순도: 단일 단계에서 일반적으로 > 95%